[本文已发表于中草药2004年第9期]

福田白菊与其它菊花栽培品种HPLC指纹特征研究

陈科力 李鹏 叶从进 詹爱萍

（湖北中医学院 武汉 430061）

摘要 目的：比较不同产地各种菊花栽培品种的HPLC指纹特征, 为构建福田白菊的HPLC指纹图谱奠定基础。方法：采用INERTSIL C₁₈柱，乙氰-水（含2%四氢呋喃，0.1%三氟醋酸）为流动相，梯度洗脱，流速1ml/min；柱温30℃，对不同菊花栽培品种以及同属其它相关种进行对比色谱分析。结果：构建了菊花的HPLC指纹图谱模式，该模式显示不同产地菊花品种的HPLC图谱具有较高的相似性，有15个共有峰，其中4个为10强峰, 2个为10强峰或次强峰。指纹数据反映了各品种菊花在地域和亲缘关系上的联系以及各自独特的特征。结论：该色谱系统可以用于构建福田白菊、湖北金菊等不同菊花品种的指纹图谱。

关键词：指纹图谱 菊花

菊花为菊科植物菊Chrysanthemum morifolium Ramat.的干燥头状花序,是我国的一种常用中药和深受欢迎的保健饮品。福田白菊是产于湖北麻城市福田河地区的白菊花,其加工方法类似于杭白菊，长期以来，以杭白菊之名销往全国各地。近年来，由于福田河白菊花品质优异，名声远播，产量增加，已成为一种新的深受欢迎的菊花品牌, 药材市场上已广泛称之为“福田白菊”。为了便于监控福田白菊的内在质量,促进这一品牌商品的发展，我们对福田白菊进行了指纹特征研究,并与其它产地的菊花栽培品种进行了对比分析，同时用同属植物野菊花和神农香菊进行对照, 以了解菊花药材的共同指纹特征和福田白菊的独特特征, 为构建福田白菊的HPLC指纹图谱奠定基础。

1.实验材料

1.1仪器与试药

waters 515 高效液相色谱仪，（Waters600E四元泵、Waters996紫外检测器、Waters脱气机）。水为超纯水。对照品：绿原酸（中国药品生物制品检定所）。乙腈、三氟醋酸、四氢呋喃为色谱纯，水为去离子水，其余试剂均为分析纯。

1.2药材  福田白菊和其它相关菊花品种样品来源见表1

表1  样品来源

Table 1  Source of samples

注：样品(1)-(7),(9)-(12)为菊科菊Chrysanthemum morifolium  Ramat.的干燥头状花序；(8)为菊科神农香菊C. indicum var.aromaticum Q.H.Liu et S.F.Zhang的干燥头状花序； (13)为菊科野菊花C.indicum L.的干燥头状花序；原植物均经作者鉴定。

Notes: samples (1)-(7) and (9)-(12) come from the dried capitulum of the compositae plant Chrysanthemum morifolium, (8)comes from C. indicum var.aromaticum Q.H.Liu et S.F.Zhang and (13) from the C.indicum L. All the plants are identified by the author.

2. 方法与结果

2.1 样品溶液制备

对照品溶液的制备  精密称取绿原酸对照品适量，用甲醇溶解制成浓度为1.00mg/ml溶液，即得。

供试品溶液的制备  取各样品粉末0.50g（过一号筛），加甲醇10ml，超声提取30min，过滤，滤液过特制SPE柱，将过滤液定容至5ml量瓶中，用0.45μm的微孔滤膜过滤，即得。

2.2 色谱条件  INERTSIL C₁₈柱（5μm, 250mm×4.6mm）；乙氰-水（含2%四氢呋喃，0.1%三氟醋酸）为流动相，梯度洗脱；检测波长328nm；进样量10μl,流速1ml/min；柱温30℃。

2.3 HPLC分析  取样品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图（图1）和各色谱峰的保留时间，以面积归一化法计算各色谱峰的相对峰面积R_A，以各谱图中峰面积最大的10个峰为10强峰（表2）。

2.4 色谱相对保留指纹谱的构建

相对保留值α的计算  选择一个出峰时间较居中、在各样品中均存在的组分作为参照峰（α=1）。求出样品所有峰的相对保留值为：α=T_Ri/T_Ra，式中T_Ri为各组分的出峰是时间，T_Ra为参照峰的出峰时间。

参照峰的选择 通过与对照品的色谱图比较，可知各样品色谱图中2号峰为绿原酸峰，选取2号峰后，保留时间在24分多钟（24.23±0.08），色谱图中的第二个强峰为参照峰，计算各峰的相对保留值α。

α值窗口的设定 计算各样品色谱图中同一峰位α值的平均值，作为每个色谱峰的标准α值。计算每个峰位α值的变异系数，除1#峰的RSD=1.3外，其余α值RSD均小于1。所以设定窗口≤1%，同一窗口内的色谱峰认定为同一α值的色谱峰，予以归并，可信限在±1%的范围内。

指纹谱的建立  按标准α值大小排序，在每个色谱峰的α值下标出该组分用归一化法计算的相对峰面积值（R_A）。每个样品色谱峰的相对保留值α和相对峰面积R_A构成了其HPLC指纹特征(表2)。

2.5重叠率  以某样品的指纹谱为基准，以其峰数与被比较样品的峰数之和为分母，两者共有峰的两倍为分子，求得其百分率即为峰的重叠率。

2.6 方法学考察

2.6.1精密度试验：取福田白菊样品（1）供试品溶液连续进样5次,测得共有峰27个，各共有峰的相对保留值的RSD＜1%，10个主要共有峰峰面积的RSD为0.7%～2.7%。

稳定性试验：取样品（1）供试品溶液在0，2，4，12， 24h 分别进样，测得各共有峰的相对保留值的RSD＜1%，10个主要共有峰峰面积的RSD为0.5% ～３.6%。

重现性试验：取福田白菊样品（1）5分，按供试品溶液制备方法制备，分别进样，测得各共有峰的相对保留值的RSD＜1%，10个主要共有峰峰面积的RSD为1.1% ～4.8%。

表2  样品的α-RA 指纹特征

Table 2  The α – RA Fingerprints characteristics of samples