湖北福田河白菊花的质量研究Ⅱ

                      叶丛进   陈科力  李鹏  刘大会

湖北中医学院药学系    430061

摘要  目的：考察采收期、加工方法及肥效对福田河白菊花质量的影响。方法 采集不同采收期、不同加工方法以及施加不同肥料的湖北福田河白菊花样品，采用紫外分光光度法测定各种菊花中总黄酮的含量；采用HPLC法测定绿原酸的含量。结果: 测定了福田河白菊花各种样品中总黄酮和绿原酸含量。结论：福田河白菊花以头水花、二水花质量较好；以微波杀青烘干和蒸气杀青烘干为较佳加工方法；以专用肥配方2号为最佳肥料配比。福田河白菊花可以根据质量差异划分为不同商品等级。

关键词: 菊花 含量测定 总黄酮 绿原酸

Study on the Quality of Flos Chrisanthemi growing in Hubei Futianhe Region Ⅱ

Objective: To ascertain the affection of the collecting season,processing methods and fertilizer recipe  to the quality of Flos Chrysanthemi growing in Hubei Futianhe Region.Methods:Various samples of Flos Chrysanthemi in Hubei Futianhe Region  are collected from different collecting time, or with different processing methods and different fertilizer recipe . UV spectraphotometry was used to determine the contents of total flavonoids,HPLC was used to determine the contents of Chlorogenic acid of these samples.Results: The contents of total flavonoids and Chlorogenic acid of all samples were determined.Conclusion:The quality of the flowers collected in first and second time was better;The methods of  first using microwave or vapor to heat green and then dry were the optimum processing methods; Special fertilizer recipe 2 was.the.optimum.fertilizer form.Also, Futianhe Flos Chrysanthemi can be divided into different merchandises according to its diverse quality.

Key words: Flos Chrysanthemi; dertermination of contents;total flavonoids; chlorogenic acid.

菊花是菊科植物菊Chrysanthemum morifolium Ramat.的干燥头状花序, 具有散风清热、平肝明目的功效,既是我国的常用中药，又是一种深受欢迎的保健饮料。湖北麻城福田河地区属于大别山区边缘，有悠久的菊花种植历史。产于福田河的白菊花，属于杭菊品系，其种质资源（研究文献另发）和加工方法类似于杭白菊，长期以来福田河菊花是作为杭白菊的优质商品之一销往全国各地。近年来，由于福田河菊花的品质优异，其名声逐渐远播，产量逐年增加，年产量接近1000吨，已成为一种深受欢迎的新的菊花商品品牌,药材市场上已广泛称之为“福田河白菊花”或“湖北菊花”。

菊花中含挥发油、菊甙、氨基酸、黄酮、绿原酸、三萜类等多种成分[1]，绿原酸已证明具有抗菌和抗炎作用[2]，菊花中的黄酮据报道具有抑制艾滋病毒的活性[3]，我们曾经比较了福田河白菊花与其它不同产地、不同品种菊花所含氯原酸与总黄酮的差异，发现福田河菊花为一种优质的菊花商品[4]。本文重点考察不同采收期、不同加工方法及不同肥效对福田河菊花有效成分总黄酮和绿原酸含量的影响，为这一品牌菊花商品的开发提供科学依据。

1.      材料与仪器

1.1  仪器和试药   U-2001可见紫外分光光度计,waters 515高效液相色谱仪，INERTSIL C₁₈柱（4um,4.6mm×250mm）。

1.2  芦丁对照品（批号0080-9705）、绿原酸对照品（批号110753-200212）购于北京中国生物制品检定所。

1.3样品:福田河白菊花不同采收期、不同加工方法以及不同肥效等样品均采自湖北麻城市福田河镇菊花GAP基地各试验小区，分别见表1、表2和表3。

2.      方法与结果

2.1样品中总黄酮的含量测定[5]

2.1.1供试品溶液的制备

精密称取样品1g, 置圆底烧瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流2小时，冷却，再称定重量，用甲醇补足减去的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml, 置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

2.1.2 标准曲线的绘制

精密称取干燥至恒重的芦丁对照品5.74mg,置25ml容量瓶中,加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取对照品0.0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0ml,分置于25ml容量瓶中，各加水至6ml,加5%亚硝酸钠溶液1.0ml,摇匀放置6min;加10%硝酸铝溶液1.0ml,摇匀放置6min,加10%氢氧化钠试液10ml,加水至刻度，摇匀，放置15min后以第一管为空白对照，在512nm波长处测定吸收度，以吸收度为横坐标（X），以对照品浓度为纵坐标（Y），得一标准曲线,其回归方程为y=0.000908+0.09549x(r=0.9996)

2.1.3样品测定 精密吸取样品液各1ml,分置25ml容量瓶中，以下按2.1.3绘制标准曲线的方法显色,以蒸馏水为空白对照，在512nm波长处测定吸收度，由标准曲线回归方程计算样品中总黄酮的含量(%)。

2.2样品中绿原酸的含量测定[6]

2.2.1 色谱条件  HPLC 色谱柱：INERTSIL C18（4μm，4.6mm×250mm）；流动相：0.1mol/l磷酸二氢钠的缓冲溶液（PH2.65）—甲醇（76：24）；检测波长： 328nm，柱温：室温；流速：1.0ml/min；进样量：10μl。

2.2.2对照品溶液的制备及线形关系的考察  精密称取绿原酸对照品0.95mg，加甲醇定容至10ml，得对照品溶液。分别吸取1.0,2.0,3.0,4.0,5.0μl对照品溶液注入液相色谱仪，测定峰面积值，以进样量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），得回归方程：Y=6033.899+7621714.737X，r=0.9999。绿原酸的量在0.095-0.475μg内与峰面积呈良好的线形关系。

2.2.3供试品溶液的制备 取菊花粉末（过1号筛）1g，精密称定，置干燥烧瓶中，准确加入50.0ml甲醇，称定重量，水浴加热回流提取2h，冷却，用甲醇调至原重，摇匀，滤过，精密吸取续滤液10ml于烧杯中，水浴蒸干，残渣加入5ml氯仿浸泡3分钟，弃去氯仿液，残渣挥干氯仿，加甲醇适量使溶解，并转移置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。

2.2.4样品测定 各样品按2.2.3项下方法制备成供试品溶液，按设定条件进行测定，测定结果分别见表1、表2、表3。

表1不同采收期福田河白菊花中绿原酸和总黄酮含量

Tab1 The content of Chlorogenic acid and total Flavone of Flos Chrisanthemi in Futianhe in different collection time

注：样品采自湖北麻城菊花GAP基地同一试验小区且采用传统加工方法。

表2不同加工方法对福田河白菊花中绿原酸和总黄酮含量的影响

Tab 2 The content of Chlorogenic acid and total Flavone of Flos Chrisanthemi in Futianhe with different preparing ways

注：福田河白菊花样品均来自湖北麻城菊花GAP基地同一试验小区，收集时间2003.11.17

表3 不同肥效对福田河白菊花中绿原酸和总黄酮含量的影响

Tab3 The content of Chlorogenic acid and total Flavone of Flos Chrisanthemi in Futianhe using various fertilizer

注：福田河白菊花样品分别收集于湖北麻城菊花GAP基地各肥效试验小区，收集时间2003.11.17，样品全部采用。肥料配方1-3系武汉华中农业大学资源环境学院根据土壤肥力状况研制的专用肥及施肥方法。肥料配方4-6系农家肥加或不加稀土肥，稀土肥购于武汉肥料市场（内蒙古包头稀土高新技术产业开发区稀土高科公司生产）。

图1   绿原酸标准品HPLC色谱图

图2   福田河白菊花药材HPLC色谱图

3讨论

3.1采收时间对菊花的外观和内在品质的影响很大。菊花的收获有头水花、二水花、三水花之分，根据表1，加工好的头水花、二水花的内在质量明显高于三水花。从商品的性状观察其质量也有明显差异，头水花、二水花花瓣玉白带微绿，有光泽，花心金黄，三水花光泽差，颜色微暗。

3.2加工方法是影响中药材质量的重要因素之一，在实验过程中我们发现杀青有利于药材的干燥，从表2可以看出杀青后干燥的加工方法要优于直接干燥的加工方法而微波杀青的加工方法要优于传统蒸汽杀青加工方法。由于微波杀青投资大，尚难推广，蒸汽杀青仍然是目前保证菊花品质的一种较好加工方法。

3.3肥料是影响中药材产量和质量的重要因素，因此我们比较了传统施肥及不同配方肥料对福田河白菊花质量的影响。从表3可以看出，合理的施肥方法对保证菊花质量具有重要意义，其中以专用肥配方2号为肥料的福田河白菊花质量最好，而且产量也较理想。因此今后在湖北麻城福田河白菊花GAP基地中，将以专用肥配方2号为菊花的专用肥料。在试验中我们还发现施用一定量的稀土肥料可以较大增强菊花的抗病能力，提前菊花的成熟期以及减少三水花和霜花的数量，从而提高收获的菊花的整体质量水平。

3.4为有利于实现商品的优质优价，根据福田河白菊花商品的外观和内在质量差异，我们考虑将其划分为不同商品等级：规定色泽好的头水花、二水花，其总黄酮含量高于5.0%、绿原酸含量高于0.3%的商品为一等品；总黄酮含量高于4.0%、绿原酸含量高于0.2%的商品为二等品；色泽差、颜色暗，但绿原酸含量高于0.2%的商品为三等品。

4参考文献

1.黄泰康.常用中药成分与药理手册.北京：中国中医药科技出版社，1994：1565

2.凌一揆主编.中药学.上海：上海科学技术出版社，1988：28.

3.Wang HK, Xia Y, et al, 1998. Recent advances in the discovery and development of flavonoids and their analogues as antitumor and anti-HIV agents.  Adv Exp Med Biol 1998;439:191-225.

4.李鹏，陈科力,等.湖北福田河白菊质量研究.中药材，2004，27（2）：102

5.陈志莲.不同贮藏期、不同品种菊花中总黄酮的含量比较.基层中药杂志，2000，15（5）：18

6.李宗，陈在敏，等.菊花中绿原酸的含量测定.中国中药杂志，1999，24（6）：329

(注该文经修改后已经被中国医院药学杂志收录,2005年11期发表.)