*李鹏 男,24岁, 湖北中医学院 中药专业2001级研究生; ** 通讯作者 kelichen8855@sohu.com 027-68889106(o) 摘要 目的:通过对湖北福田河菊花和其它商品菊花总黄酮和绿原酸含量的比较研究,考察福田河菊花的质量。方法 采用紫外分光光度法测定各种菊花中总黄酮的含量;采用HPLC法测定绿原酸的含量,色谱柱为INERTSIL C18柱(4um,4.6mm×150mm),流动相为甲醇-0.1mol/l磷酸盐缓冲液(PH 2.7)24:76,检测波长为328nm。结果:福田河菊花总黄酮含量为6.17-8.19%,绿原酸含量为0.185-0.352%,平均值均高于所测杭菊和贡菊样品 。结论:福田河菊花为一种优质的菊花商品。 关键词: 菊花 含量测定 总黄酮 绿原酸
菊花是菊科植物菊Chrysanthemum morifolium Ramat.的干燥头状花序,是我国的常用中药,也是一种深受欢迎的保健饮料,具有散风清热、平肝明目的功效。湖北麻城福田河地区属于大别山区边缘,有悠久的菊花种植历史。产于福田河的白菊花(简称福菊或福白菊),属于杭菊品系,其种质资源(研究文献另发)和加工方法类似于杭白菊,长期以来福田河菊花是作为杭白菊的优质商品之一销往全国各地。近年来,由于福田河菊花的品质优异,其名声逐渐远播,产量逐年增加,年产量近1000吨,已成为一种新的深受欢迎的菊花商品品牌,药材市场上已广泛称之为“福田河白菊花”或“湖北菊花”。 菊花中含挥发油、菊甙、氨基酸、黄酮、绿原酸、三萜类等多种成分[1],绿原酸已证明具有抗菌和抗炎作用,菊花中的黄酮据报道具有抑制艾滋病毒的活性[2],为了考察福田河菊花的内在质量,我们初步测定了其几个样品总黄酮和绿原酸含量并与几个杭菊、贡菊样品进行了比较,为这一品牌菊花商品的开发提供科学依据。
材料与仪器 仪器和试药 U-2001可见紫外分光光度计,waters 515高效液相色谱仪,INERTSIL C18柱(4um,4.6mm×150mm),标准品芦丁、绿原酸由中国生物制品检定所提供。 样品: ①杭菊 2002年11月采于浙江桐乡 ②杭菊 2002年11月购于浙江惠盛精致白菊花制品厂(一等品) ③杭菊 2002年11月购于浙江惠盛精致白菊花制品厂(二等品) ④福田河白菊 2002年11月采集于湖北麻城福田河镇 ⑤福田河白菊 2003年3月购于湖北麻城福田河白菊花制品厂(一等品,头水花) ⑥福田河白菊 2003年3月购于湖北麻城福田河白菊花制品厂(二等品,二水花) ⑦贡菊 2002年9月购于武汉市武昌区药材公司 注:样品收集后置于干燥器内避光保存。文中的一等品、二等品为本文作者根据价格拟定的商品等级,厂家并未标注商品等级。 方法与结果 2.1样品中总黄酮的含量测定[3] 2.1.1样品溶液的制备:分别精密称取样品各1g(同时按《中国药典》2000年版一部附录水分测定一法测定水分),置索氏提取器中,加95%乙醇50ml连续提取至无色为止.提取液定容于100ml容量瓶中,摇匀备用. 2.1.2 标准曲线的绘制:精密称取干燥至恒重的芦丁对照品5.74mg,置25ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,精密吸取对照品0.0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0ml,分置于25ml容量瓶中,各加水至6ml,加5%亚硝酸钠溶液1.0ml,摇匀放置6min;加10%硝酸铝溶液1.0ml,摇匀放置6min,加10%氢氧化钠试液10ml,加水至刻度,摇匀,放置15min后以第一管为空白对照,在512nm波长处测定吸收度,以吸收度为横坐标(X),以对照品浓度为纵坐标(Y),得一标准曲线,其回归方程为y=0.000908+0.09549x(r=0.9996) 2.1.3样品测定 精密吸取样品液各1ml,分置25ml容量瓶中,以下按2.1.2绘制标准曲线的方法显色,以蒸馏水为空白对照,在512nm波长处测定吸收度,由标准曲线回归方程计算样品中总黄酮的含量(%). 2.1.4 样品测定结果 表1 不同菊花样品中水分的含量 编号 样品名 水分* (%) RSD(%)(n=5) ①②③ 杭菊杭菊杭菊 2.171.061.28 1.21.72.8 ④⑤⑥ 福田河白菊福田河白菊福田河白菊 2.771.891.65 0.51.41.9 ⑦ 贡菊 3.84 2.1 注:本文所测水分并非商品菊花中水分的含量,而是置于干燥器中放置一段时间后的水分含量。 表2 不同产地六种菊花中总黄酮的含量 编号 样品名 总黄酮(%) RSD(%)(n=3) Ⅰ Ⅱ ①②③ 杭菊杭菊杭菊 5.026.415.40 5.096.485.47 1.01.62.3 ④⑤⑥ 福田河白菊福田河白菊福田河白菊 5.608.046.71 6.178.196.83 2.51.42.8 ⑦ 贡菊 7.02 7.26 3.0 注:Ⅰ为干燥前样品,Ⅱ以干燥品计* 2.2样品中绿原酸的含量测定[4,5] 2.2.1 色谱条件 使用购至天津特纳科学仪器有限公司的INERTSIL HPLC COLUMN(4um,4.6mm×150mm)。流动相:0.1mol/l磷酸二氢钠的缓冲溶液(PH2.65)—甲醇(76:24)。检测波长为328nm,柱温为室温,流速1.0ml/min,进样量为10ul。 2.2.2对照品溶液的制备及线形关系的考察 精密称取绿原酸对照品0.95mg,加双蒸水定容至10ml得对照品溶液。分别吸取1.0,2.0,3.0,4.0,5.0ul对照品溶液注入液相色谱仪,测定峰面积值,以进样量为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y),得回归方程:Y=6033.899+7621714.737X,r=0.9999。绿原酸浓度在0.095-0.475ug内与峰面积呈良好的线形关系。 2.2.3供试品溶液的制备 取菊花粉末(过1号筛)1g,精密称定,置干燥烧瓶中,准确加入50.0ml甲醇,称定重量,水浴加热回流提取2h,冷却,用甲醇调至原重,摇匀,滤过,精密吸取续滤液10ml于烧杯中,水浴蒸干,残渣加入5ml氯仿浸泡3分钟,弃去氯仿液,残渣挥干氯仿,加水适量使溶解,并转移置25ml量瓶中,加水置刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45um)滤过,即得。 2.2.4样品测定结果 表3 不同产地六种菊花中绿原酸的含量 编号 样品名 绿原酸(%) RSD(%) (n=3) Ⅰ Ⅱ ①②③ 杭白菊杭白菊杭白菊 0.1090.2940.1402 0.1110.2970.142 1.52.01.7 ④⑤⑥ 福白菊福白菊福白菊 0.2010.3450.182 0.2070.3520.185 1.21.31.6 ⑦ 贡菊 0.087 0.090 0.5 注:拉丁学名均为C.morifolium, Ⅰ为干燥前样品,Ⅱ以干燥品计 图1 绿原酸标准品HPLC色谱图 图2 福田菊花HPLC色谱图 3结论 3.1 由表2可知福田河白菊花样品的平均总黄酮含量和平均绿原酸含量均高于所检验的杭菊和贡菊样品,并均基本接近或超过药典规定绿原酸含量的标准。这说明福田河白菊花是一种品质优良的菊花。 3.2 不同菊花等级的内在质量有较大差异。菊花的收获有头水花、二水花之分,从商品的性状观察其质量有明显差异。样品⑤为一等品,为头水花中加工较好的菊花,样品⑥为二水花菊花,这两者的总黄酮和绿原酸的含量相差很大,尤其是绿原酸的含量一等品几乎为二等品的2倍。在口感的好坏和香气浓度上,一等品也远好于二等品。因此,严格标明商品的等级,划分内在质量标准,优质优价,是促进福田河菊花发展的重要工作。 3.3 文献报道贡菊中绿原酸含量高[4],本文发现所测的一个样品中总黄酮含量较高,但绿原酸含量较低,这是否与储存时间过长有关, 或与加工方法有一定联系,我们拟进一步进行研究。 4参考文献 1 黄泰康.常用中药成分与药理手册.北京:中国中医药科技出版社,1994:1565 2 Wang HK, Xia Y, et al, 1998. Recent advances in the discovery and development of flavonoids and their analogues as antitumor and anti-HIV agents. Adv Exp Med Biol 1998;439:191-225. 3 陈志莲.不同贮藏期、不同品种菊花中总黄酮的含量比较.基层中药杂志,2000,15(5):18 4 李宗,陈在敏,等.菊花中绿原酸的含量测定.中国中药杂志,1999,24(6):329 5 中华人民共和国药典,2000年版,254页。 Study on the quality of Futianhe Flos Chrysanthemi in Hubei province Li Peng Chen Keli Ye Congjin Hubei College of Traditional Chinese Medicine, Wuhan 430061, PRChina
Abstract: Objective:Through comparing the contents of total flavoloid and chlorogenic acid of Flos Crysanthemun growing in Futianhe region and other places to evaluate the quality of Futianhe Flos Crysanthemi. Methods:The total flavoloids and chlorogenic acid in various kinds of Flos Crysanthemi commodities were determined by ultraviolet spectrophotometry and HPLC. HPLC analysis was carried out on INERTSIL C18 Column(4um,4.6mm×150mm),with methanol-0.5mol/l phosphate buffer solutions (PH2.7)24:76 as the mobile phase. The detection wavelength was 238nm. Results: The content of total flavoloid of Futianhe Flos Crysanthemi was 6.17-8.19% and the content of chlorogenic acid was 0.185-0.352%,all the average value is higher than the one of samples of Hang Flos Crysanthemi and Gong Flos Crysanthemi. Conclusion:The Futianhe Flos Crysanthemi is one of high quality Flos Crysanthemi commodities. Key words: Crysanthemum morifolium; dertermination of contents; total flavoloids;chlorogenic acid。 另:(2004年11月,河北以岭制药对福白菊GAP基地现场采集5个样品,总黄酮检测含量为8.3-8.7%,高于安徽、江苏等地菊花。 样品采集、检测人:裴彩云 以岭制药中医二室,中药专业硕士)
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